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氯丙嗪快速檢測試劑盒

使用說明書

【測定原理】

本試劑盒采用間接競爭ELISA法檢測尿樣和組織等樣本中的氯丙嗪，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進行，樣本中的氯丙嗪和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭標記有辣根過氧化酶的抗氯丙嗪抗體，通過洗滌后，用TMB底物顯色，樣品中的氯丙嗪含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出氯丙嗪含量。

【試劑盒技術(shù)指標】   

規(guī)      格：96孔/盒

靈 敏 度： 1ppb

檢測時間： 45min

樣本檢測下限：

尿      液………………………………… 3ppb

組      織………………………………… 2ppb

飼      料  ……………………………… 1ppb

交叉反應(yīng)率：

氯丙嗪（Salbutamol ）………………  100%

樣本回收率：

尿     樣   ……………………… 85%±10%

組     織   ……………………… 85%±15%

飼     料   ……………………… 85%±15%

【試劑盒組成】

• 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
• 氯丙嗪標準品溶液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
• 高濃度標準品：×1瓶：（1ml/瓶） 1ppm 
• 酶標記物      7ml……………………… 紅色帽
• 抗體工作液  7ml………………………… 綠色帽
• 底物A液     7ml  ……………………  棕色帽
• 底物B液     7ml  ……………………  黑色帽
• 終  止  液     7ml  …………………  黃色帽
• 2X濃縮復(fù)溶液50 ml  ……………………藍色帽
• 20X濃縮洗滌液40 ml  …………………白色帽

【 所用儀器、試劑】

具備的儀器：微孔酶標儀、氮氣吹干裝置、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管微量移液器：單道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl

試 劑： 乙腈、甲醇、正己烷、無水硫酸鈉

【實驗前溶液配制】

配液1、將30ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

配液2：1X樣本復(fù)溶液

將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于樣本的復(fù)溶。

【樣本前處理步驟】

樣本處理前須知

處理任何樣本時，都必須注意：

（1）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

（2）實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

（a）尿樣本的處理方法

取50µl清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要過濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

由于尿液陰性樣本可能會產(chǎn)生背景干擾 （在某些情況下干擾數(shù)值在標準2到3之間），所以推薦標準3即0.3ppb作為尿液陽性結(jié)果的CUT OFF判斷值。

樣本稀釋倍數(shù)：1

（b）組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法

稱取均勻后的組織樣本2±0.05g ，加入6ml乙腈溶液，充分振蕩2min。4000r/min以上，15℃離心10min；

1、 取上清液4ml，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；

   肉樣本：

加入1ml 去樣本的復(fù)溶混合振蕩30s，取50µl用于分析。

  肉樣本稀釋倍數(shù)：1

肝臟樣本：

加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 樣本的復(fù)溶混合振蕩30s，4000r/min以上，15℃離心5min，去除上層；取50µl下層 與50µl樣本的復(fù)溶混勻；取50µl用于分析。

      肝樣本稀釋倍數(shù)：2

（c）飼料樣品的處理方法

1、 稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml甲醇，再加入5g無水硫酸鈉，放振蕩器上振蕩2min；15℃ 4000r/min以上離心10min；

2、 吸出離心后的上清液2ml，于56℃氮氣吹干，用1 ml 樣本復(fù)溶溶解干燥的殘留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上離心5min

3、 取50µl下層 與50µl去樣本的復(fù)溶混勻；取50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：10

【酶標免疫分析程序】   

操作步驟：

1．將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2．按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3．編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

4．加標準品/樣本50µl /孔，然后加酶標記物50μl/孔，再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。

5．取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡用干凈的槍頭刺破）。

6．顯色：每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。

7．測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）。

【結(jié)果判定】

  結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含氯丙嗪的含量成負相關(guān).

1、粗略判定：

用樣品的平均吸光度值與標準值比較即可得出樣本所含氯丙嗪濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.892；1ppb為1.501；3ppb為1.175； 9ppb為0.751；27ppb為0.421； 81ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是27ppb-81ppb；樣品2的濃度范圍是3ppb-9ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實際濃度。             

2、定量分析：

所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以個標準（0標準）的吸光度值（B₀）再乘以100%，即：

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯丙嗪標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。

3、標準準曲線：

B/B0 (%)

1          3           9         27        81

氯丙嗪(ppb) [µg/kg]：氯丙嗪檢測試劑盒的回歸曲線

4、再現(xiàn)性：

%CV 

            0        1       3       9     27       81

 氯丙嗪(ppb) [µg/kg]：氯丙嗪檢測試劑盒的精密度

由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出氯丙嗪檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)氯丙嗪濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。

【注意事項】

• 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。
• 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
• 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
• 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
• 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
• 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
• 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A_450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
• 該試劑盒反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲存】原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、批號見外包裝。

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