通用型基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）
版號：TQ 201909001
【產品概述】
本試劑盒采用可以特異性結合DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統，用于提取血液、唾液、口腔拭子、動物組織、糞便、飼料中的基因組DNA。可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質量穩定可靠。使用本試劑盒回收的DNA 可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、熒光定量PCR，文庫構建、Southern 雜交等實驗。
【試劑盒組成】
序號 | 產品組分 | 規格（50測試/盒） | 序號 | 產品組分 | 規格（50測試/盒） |
1 | 緩沖液GA(Buffer GA) | 15 ml | 5 | 洗脫緩沖液TE(Buffer TE) | 15 ml |
2 | 緩沖液GB(Buffer GB) | 15 ml | 6 | Proteinase K | 1 ml |
3 | 緩沖液GD(Buffer GD) | 13 ml | 7 | 吸附柱CB3(Spin Columns CB3) | 50個 |
4 | 漂洗液PW(Buffer PW) | 15 ml | 8 | 收集管(2 ml)(Collection Tubes) | 50個 |
【適用范圍】 血液、唾液、口腔或環境拭子、動物組織、糞便、飼料等樣品。
【注意事項】
請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA/RNA片段較小且提取量也下降。
2.若無特別說明，所有離心步驟均在室溫完成。
【操作步驟】
使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。
1 樣本前處理
1.1 血液
a. 取200 μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，
b. 加入20 μl Proteinase K溶液
c. 加入200 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
d. 加人200 μl 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
1.2 組織
a. 切取30-50 mg 動物組織樣品，加入準備好的 2.0ml 離心管，樣品應盡量破碎，便于后續消化；
b. 加入20 μl Proteinase K溶液和200 μl緩沖液GA ，渦旋振蕩混勻，于恒溫水浴鍋 65 ℃水浴30 min，期間每隔 3-5 min 渦旋混勻或者置于水浴振蕩儀中消化（如組織塊未消化*，應延長水浴時間至組織塊消失），簡短離心以收集附著在管壁及管蓋的液體。
c. 加入200 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
d. 加人200 μl 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
1.3 拭子
a. 如果是干拭子樣本直接加入500 μl緩沖液GA；如果是含有唾液保存液的拭子樣本，拿到樣品管后混勻，12000 rpm離心3 min，去上清保留100 μl的體積，再加入500 μl緩沖液GA。
b. 加入20 μl Proteinase K溶液，渦旋10 sec混勻，65℃放置30 min，每隔10 min渦旋混勻數次。然后吸取400 μl上清進行后續實驗。
c. 加入等體積400 μl緩沖液GB，65℃放置15 min，每隔5min渦旋混勻數次。
d. 加入400 μl無水乙醇，充分顛倒混勻。
1.4 唾液
a. 按照要求取出200 μl唾液樣本，加入等體積200 μl緩沖液GA
b. 加入20 μl Proteinase K溶液，顛倒混勻，65℃放置30 min，每隔10 min渦旋混勻數次。
c. 加入等體積400 μl緩沖液GB，65℃放置15 min，每隔5min渦旋混勻數次。
d. 加入400 μl無水乙醇，充分顛倒混勻。
1.5 糞便
a. 稱取糞便樣本150 mg-300 mg 至 2.0ml 離心管，加入800 μl緩沖液GA，渦旋1min，65℃水浴10 min，期間顛倒混勻幾次。
b. 水浴后12,000 rpm(約13,400×g) 離心3min，取300 μl 上清至新的2 ml 離心管中。
c. 注意：(選做) 若后續實驗對 RNA 敏感，可加入RNase A 溶液去除RNA。
d. 加入20 μl Proteinase K，振蕩混勻，再加入300 μl 緩沖液 GB，渦旋振蕩混勻，65 ℃水浴放置15 min，期間每隔3-5 min 振蕩混勻。
e. 簡短離心后加入300 μl 無水乙醇，顛倒數次混勻。
*注意：加入無水乙醇后可能會出現渾濁，但不影響DNA 提取。
1.6 飼料
a. 切取30-50 mg 飼料樣品，加入準備好的 2.0 ml 離心管，加入20 μl Proteinase K溶液和500 μl緩沖液GA ，渦旋振蕩混勻，于恒溫水浴鍋 65 ℃水浴30 min，期間每隔 3-5 min 渦旋混勻或者置于水浴振蕩儀中消化（如遇到比較干的飼料樣本，可適當延長裂解時間）。
b. 12,000 rpm(約13,400×g) 離心3min，取300 μl 上清至新的2 ml 離心管中。
c. 加入300 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
d. 加人300 μl 無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
2 吸附
a. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放回收集管中。
3 漂洗
a. 向吸附柱CB3中加入500 μl緩沖液GD （使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
b. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。
c. 重復操作步驟b。
d. 將吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數分鐘，以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
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