規格：100 管/48 樣
土壤脫氫酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內活性微生物量以及其對 有機物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標。
測定原理：
氫受體 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細胞呼 吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟 (Triphenyl Formazone, TF)，TF 呈現紅色，在波 長 485nm 處有最大吸收峰，采用分光光度法于 485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。
自備實驗儀器及用品：
篩子、天平、恒溫培養箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比 色皿/96 孔板、冰、蒸餾水、丙酮 (不允許快遞，請用戶自備)。
試劑的組成和配制：
試劑一：粉劑×1 瓶，使用前加 5mL 水溶解，4℃避光保存 (盡量現配現用)。 試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：丙酮， 自備。
樣品處理：
1. 土壤樣品：準確稱取過 40 目篩的新鮮土壤樣品約 0. 1g(以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸)。
2. 污泥樣品：污泥用蒸餾水洗滌，10000g ，25℃ ，離心 10min ，棄上清，反復 3-4 次。 測定步驟和操作表：
1 、分光光度計/酶標儀預熱 0min ，調節波長至 485nm。
2 、操作表
對照管測定管
樣品 (g)0.050.05
試劑一 (mL)0.1
試劑二 (mL)0.20.1
置于 EP 管中，充分混勻，37℃ ，暗培養 6h ，取出后立即冰浴 5min
試劑三 (mL)0.10.1
反復震蕩數次，37℃保溫 10min ，10000g ，4℃ ，離心 5min ，取 200μL 上清于微量石英比色 皿/96 孔板，對照管調零，測定 A 485 。
脫氫酶活力計算：
酶活單位定義：
在 37℃時，每克樣品每小時使反應體系 OD 值每增加 0.01 為一個酶活單位。 計算公式：脫氫酶活性 (U/g) =A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W
T ：培養時間，h；W：樣品質量，g
注意事項：
1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃ ，最好在一周內使用，若出現紅色，則不能使用。
2. 試劑三易揮發，有毒，為了您的健康，請穿實驗服，戴口罩，戴乳膠手套操作。
3. 反應完成后立即冰浴以終止反應，并去除干凈殘留的反應液。
4. 如果測定出來的吸光值較大，減少樣品用量再進行測定。
5. 試劑盒 2-8℃保存。
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